Главная » 2014 » Июнь » 30 » Скачать Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов. Давлетбаева, бесплатно
0:14 AM
Скачать Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов. Давлетбаева, бесплатно
Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов
Диссертация
Автор: Давлетбаева, Ляйсан Раисовна
Название: Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов
Справка: Давлетбаева, Ляйсан Раисовна. Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов : диссертация кандидата биологических наук : 14.00.36 / Давлетбаева Ляйсан Раисовна; [Место защиты: Науч.-производ. объединение по мед. иммунобиологическим препаратам "Микроген"] Уфа, 2007 111 c. : 61 07-3/1775
Объем: 111 стр.
Информация: Уфа, 2007
Содержание:
Список сокращений и условных обозначений
Введение
Обзор литературы
Глава 1 Валидация методов контроля качества
11 Валидация аналитических методов
12 Международные документы по валидации аналитических методов
13 Валидация количественного иммуноферментного анализа
Собственные исследования
Глава 2 Материалы и методы
Глава 3 Валидация имму но ферментной тест-системы для количественного определения овальбумина
31 Валидация иммуноферментной тест-системы для количественного определения овальбумина по характеристикам: специфичности, диапазону калибровочных концентраций, линейности, пределам обнаружения и количественного определения
32 Валидация иммуноферментной тест-системы для определения овальбумина по показателям точности метода: прецизионности (повторяемости и воспроизводимости), правильности
Глава 4 Валидация иммуноферментного метода определения активности IgG-антител к цитомегаловирусу в препаратах внутривенных иммуноглобулинов
41 Определение активности антицитомегаловирусных антител в препаратах внутривенных иммуноглобулинов методом параллельных линий
42 Валидация иммуноферментного метода определения активности IgG-антител к цитомегаловирусу в препарате специфического иммуноглобулина против цитомегаловируса по характеристикам и показателям точности метода
Введение:
Актуальность проблемы
В соответствии с современными требованиями производства лекарственных средств, изложенными в российских документах (ГОСТ Р 52249-04, МУ 3.3.2.1886-04 и СП 3.3.2.1288-03, Приказ Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития от 29.01.2007 г. № 01И-61/07), использование валидированных аналитических методов является обязательным как при разработке новых лекарственных средств, так и при их рутинном контроле. Валидация аналитического метода - процесс демонстрации соответствия методики предполагаемому применению путем лабораторных исследований специфических характеристик. Валидация аналитического метода проводится при внедрении новой методики, изменении условий анализа лекарственных средств или пересмотре их в дальнейшем.
Среди аналитических методов контроля качества иммунобиологических препаратов одно из ведущих мест занимает иммуноферментный анализ (ИФА). В отношении качественного ИФА валидация считается рутинной процедурой, однако в отношении количественного анализа она остается недостаточно разработанной [Шалепо К.В., 2003].
Овальбумин (OA) является основным маркером присутствия остаточных количеств субстрата репродукции вирусов целого ряда вакцинных препаратов, предназначенных для профилактики гриппа, кори, краснухи, паротита, бешенства, желтой лихорадки [Chow W.C., 2005; Сох J.E., 2006], и считается примесью, ответственной за развитие аллергических реакций при применении вакцин и препаратов лейкоцитарного интерферона. В связи с этим валидация метода иммуноферментного определения OA в иммунобиологических препаратах является обязательным условием создания безопасных препаратов, а также удобной моделью разработки подходов к валидации количественных тест-систем. Необходимость повышения качества метода количественного контроля содержания OA обусловлена тем, что он содержится в препарате «Гриппол», который включен в национальный календарь прививок, а препараты интерферона являются жизненно-необходимыми и часто используемыми в клинической практике лекарственными средствами. Допустимое остаточное количество OA в отечественной гриппозной вакцине составляет не более 50 нг/дозу, однако этого количества достаточно, чтобы вызвать реакцию гиперчувствительности у лиц с аллергией к яичному белку [James J.M. et al., 1995]. Использование зарубежных тест-систем контроля содержания OA в настоящее время не рекомендовано в связи с тем, что они не зарегистрированы в РФ, а также из-за высокой стоимости.
Метод ИФА используется для определения антител класса IgG к цитомегаловирусу (IgG-AT к ЦМВ) в препаратах иммуноглобулинов. С этой целью применяются тест-системы ИФА, производимые отечественными и зарубежными фирмами для клинических лабораторий. Разработка новых иммуноглобулиновых препаратов с высоким содержанием IgG-AT к ЦМВ на базе филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ и необходимость оценки их специфической активности с помощью метода ИФА потребовала исследования основных параметров валидации этих тест-систем.
Цель исследования
Оценка качества и определение параметров валидации иммуноферментных тест-систем для количественного определения овальбумина и IgG-антител к цитомегаловирусу в иммунобиологических препаратах.
Задачи исследования
1 Определить валидационные характеристики иммуноферментной тест-системы для выявления овальбумина: специфичность, диапазон калибровочных концентраций, пределы обнаружения и определения, линейность.
2 Определить показатели точности иммуноферментной тест-системы для выявления овальбумина: правильность, повторяемость и внутрисерийная воспроизводимость.
3 Оценить параметры валидации иммуноферментной тест-системы для определения IgG-антител к цитомегаловирусу по показателям линейности, пределов определения, мер прецизионности.
4 Разработать практические рекомендации по валидации количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов.
Научная новизна
Впервые на модели иммунобиологических препаратов (вакцина «Гриппол» и препараты человеческого лейкоцитарного интерферона) разработаны параметры валидации иммуноферментной тест-системы для количественного определения овальбумина.
Новыми являются данные по валидации иммуноферментного метода определения антител класса IgG к цитомегаловирусу при определении специфической активности препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения («Иммуновенин», «ЦМВ ИГ» - препарат иммуноглобулина человека против цитомегаловируса, «Цитотект», «Хумаглобин» и др.). Показано, что тест-система «ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-G» может быть использована не только для тестирования плазмы крови больных и доноров, но и для контроля качества специфической активности иммуноглобулиновых препаратов.
Определены пределы обнаружения и количественного определения аналита по ограничительным минимальным и максимальным критериям. Проведена оценка перекрестного реагирования антител на уровне предела количественного определения овальбумина.
Научно-практическая значимость работы
Положительные результаты валидационных испытаний являются доказательной основой применения метода иммуноферментного анализа для количественного определения OA в вакцине «Гриппол» и препаратах человеческого лейкоцитарного интерферона. Установлены критические параметры тест-системы для количественного определения OA -правильность и прецизионность, позволяющие при их регулярном контроле сохранять надежность метода.
Показана приемлемость использования тест-системы «ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-G» для определения IgG-AT к ЦМВ в препаратах иммуноглобулинов для внутривенного введения. Данный метод может быть использован не только для отбора сырья с целью получения препарата, но и для количественной оценки специфической активности конечного препарата, а также для проведения сравнительного анализа различных препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения. Это позволяет рекомендовать метод иммуноферментного анализа содержания IgG-AT к ЦМВ с помощью тест-системы «ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-G» в качестве референс-метода для количественного определения антител IgG-класса к цитомегаловирусу в препаратах иммуноглобулинов методом параллельных линий в соответствии с требованиями Европейской фармакопеи.
Валидация количественного метода иммуноферментного анализа является основой стандартизации и контроля активности ряда выпускаемых медицинских иммунобиологических препаратов. В теоретическом плане проведенные исследования расширяют знания в области валидации количественных иммуноферментных тест-систем. Расширены подходы к валидации и оценке наиболее важного валидационного параметра -специфичности иммуноферментной тест-системы для количественного определения овальбумина.
Внедрение результатов исследования в практику
На основании проведенных исследований разработаны и изданы методические указания «Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов» (Уфа, 2007), которые внедрены в работу филиала «Иммунопрепарат» Федерального государственного унитарного предприятия «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Проведенные исследования позволили оптимизировать и стандартизовать иммуноферментную тест-систему для количественного определения овальбумина в иммунобиологических препаратах.
Основные положения, выносимые на защиту
1 Валидность метода иммуноферментного анализа для определения овальбумина в иммунобиологических препаратах позволяет использовать его в качестве референсного метода для оценки содержания овальбумина в вакцине «Гриппол» и препаратов человеческого лейкоцитарного интерферона.
2 Количественное определение иммуноглобулинов класса G к цитомегаловирусу с помощью рекомбинантной тест-системы «ДС-ИФА-АНТИ-ЦМВ-G» рекомендовано в качестве метода контроля специфической активности препаратов иммуноглобулинов из плазмы крови человека по содержанию IgG антител к цитомегаловирусу.
3 Провалидированные отечественные иммуноферментные тест-системы для количественного определения овальбумина и IgG-антител к цитомегаловирусу по чувствительности, линейности, специфичности соответствуют требованиям нормативных документов по валидации аналитических методов исследований.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены на ряде научных форумов: Всероссийской научной конференции «Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке: разработка, производство и применение» (Уфа, 2005); Международной научной конференции «Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий» (Томск, 2006); научной конференции иммунологов Урала «Актуальные вопросы фундаментальной и клинической аллергологии и иммунологии» (Оренбург, 2006); научной конференции «Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека» (Челябинск, 2006); научно-практической конференции «Вакцинология - 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики и лечения инфекционных заболеваний» (Москва, 2006); межрегиональной научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири» (Омск, 2007).
Диссертация апробирована на заседании Ученого совета филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ (протокол от 19.09.2007 г. № 4) и на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан (протокол от 04.10.2007 г. № 64).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано девять научных работ, в том числе одна в ведущем рецензируемом журнале, рекомендованном Высшей аттестационной комиссией (ВАК) Министерства образования и науки Российской Федерации.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 111 страницах, содержит 25 таблиц и 12 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы (одна глава), собственных исследований (две главы), заключения и выводов. Список литературы включает 140 источников (54 отечественных и 86 зарубежных).